MÁY REAL-TIME PCR ĐẾM TẢI LƯỢNG VIRUS CHO PHÒNG XÉT NGHIỆM SINH HỌC PHÂN TỬ

Nguồn: http://chienbio.blogspot.com/2015/09/tu-van-he-thong-real-time-pcr-em-tai.html

1. Các hệ thống Real-time PCR trên thị trường

Hiện nay trên thị trường có 2 dòng máy chính là: Hệ thống đóng (tự động) và hệ thống mở (bán tự động). Mỗi hệ thống đều có ưu và nhược điểm riêng.

Hệ thống đóng bắt buộc phải sử dụng hóa chất và vật tư độc quyền của hãng, chi phí rất đắt đại đa số bệnh nhân của Việt Nam không có điều kiện chi trả cho chi phí xét nghiệm. Hệ thống này thực hiện được rất ít tác nhân (HBV, HIV, HCV, Lao). Ưu điểm của hệ thống này là tự động hoàn toàn tránh được sai sót do con người và đạt độ chính xác cao.

Các hệ thống đóng trên thị trường có 3 hãng chính: Roche, Qiagen, Abbott

Hệ thống mở có thể sự dụng được nhiều loại kit thương mại trên thị trường người dùng cũng có thể tự chuẩn hóa các hóa chất xét nghiệm mà KHÔNG PHỤ THUỘC VÀO NHÀ CUNG CẤP nên chi phí xét nghiệm rất rẻ và phủ hợp đại đa số người dân Việt Nam. Nhược điểm của hệ thống này là để đạt độ chính xác tương đương với hệ thống đóng, đòi hỏi đội ngũ kỹ thuật viên lành nghề cũng như cán bộ phân tích có chuyên môn và kinh nghiệm.

Ngoài ra, hệ thống mở khách hàng có thể trang bị thêm máy tách chiết ADN tự động thay cho việc tách chiết ADN thủ công  để giảm sự sai sót của yếu tố con người. Nên chọn các hệ thống tách chiết có thể sử dụng được các kit đang sử dụng phổ biến tại Việt Nam và thế giới (Qiagen, Roche....)

Các kit tách chiết ADN của các hãng hiện nay quy trình rất đơn giản, thao tác ít nên với đội ngũ kỹ thuật viên được tập huấn tốt hoàn toàn có thể đảm bảo chất lượng tương đương với hệ thống tách chiết tự động. Do đó, thời gian đầu với lượng mẫu trung bình (khoảng 300 XN/tháng) không cần trang bị hệ thống tách chiết tự động.

2. Một số tiêu chí lựa chọn hệ thống Real-time PCR phù hợp cho phòng thí nghiệm chẩn đoán

Hệ thống dùng cho mục đích đếm tải lượng virus, và phát hiện các căn nguyên nhiễm trùng bằng phương pháp sinh học phân tử. Ngoài ra hệ thống có thể thực hiện được cho phát hiện các đột biến gene gây ung thư, phát hiện các bệnh di truyền.

          Hệ thống real-time PCR mở dùng trong bệnh viện phải đáp ứng các tiêu chuẩn đặc biệt quan trọng sau:

·        Bộ phận gia nhiệt thiết kế phù hợp với các loại tube thông dụng trên thị trường hiện nay(PCR 0,2ml; strip 0,2ml, 0.1 ml)

·        Thể tích phản ứng của hệ thống được thiết kế phù hợp với các kit thương mại hiện nay là từ 25  µl – 50 µl, thể tích nhỏ hơn 25 ml là không phù hợp. Thể tích mẫu < 25 µl/phản ứng thường không đạt độ nhạy cho mục đích chẩn đoán và dễ xảy ra sai sót thao tác pippeting.

·        Hệ thống kính lọc phải thông dụng, số lượng kênh kính lọc (Tác nhân phát hiện được đồng thời) phải ≥ 2. Nên chọn các hệ thống có 4 hoặc 5 kênh kính lọc để có thể sử dụng các kit Multiplex Real-time PCR hiện nay trên thị trường.

·        Bộ lưu điện sử dụng cho hệ thống Real-time PCR phải sử dụng được trên 2h để đảm có thể chạy xong 1 quy trình phản ứng trong trường hợp mất điện. Quy trình chạy  máy phải liên tục, chỉ giản đoạn 1 giây khi chạy máy cũng phải tiến hành lại lô thí nghiệm. Bộ lưu điện có công suất phù hợp nhằm đảm bảo việc trả kết quả cho bệnh nhân kịp thời cũng như giảm thiểu thiệt hại khi sự cố mất điện xảy ra.

·        Hệ thống phải sử dụng được hầu hết các kit thương mại trên thị trường phát hiện các căn nguyên truyền nhiễm phổ biến như: Virus viêm gan B (HBV), virus viêm gan C (HCV), vi khuẩn lao, vi rút HPV là nguyên nhân gây bệnh ung thư cổ tử cung ở phụ nũ, vi rút chân tay miệng (EV/EV71), Rubella, các virus gây bệnh da liễu, bệnh nhiễm khuẩn sinh dục dễ gây vô sinh do chlamydia, các virus gây ảnh hưởng tới thai nhi trong thời kỳ người mẹ mang thai như Cytomegalovirus (CMV), virus gây bệnh cơ quan sinh dục và gây vô sinh Herpes (HSV), virus gây tăng bạch cầu đơn nhân EBV,….

Danh mục thiết bị cơ bản bao gồm:

STT	THIẾT BỊ		SL	MỤC ĐÍCH
1	Máy Realtime PCR Hệ thống mở, có thể sử dụng với nhiều loại kit thương mại khác nhau. Phù hợp cho mục đích ứng dụng trong bệnh viện Nên chọn của các hãng sản xuất Mỹ hoặc Đức		1	Đây là hệ thống trung tâm của phòng xét nghiệm. Ứng dụng đếm tải lượng vi rút HBV, HCV, HIV. Phát hiện các căn nguyên truyền nhiễm như Lao, HPV, lậu, Chlamydia, CMV, HSV, EV, EV71, Dengue... Ngoài ra có thể ứng dụng phát hiện các đột biến kháng thuốc, đột biến gene có vai trò trong tiên lượng và điều trị đích các bệnh ung thư như.
2	Bộ máy tính và máy in (cung cấp trong nước)		1	Điều khiển hệ thống real-time PCR, phân tích, làm phiếu và trả kết quả.
3	Bộ lưu điện Công suất từ 1 – 1,5 KVA		1	Dùng cho hệ thống real-time PCR và máy tính. Có thể cấp điện cho toàn hệ thống lên đến 2h. Hệ thống này đảm bảo có thể chạy xong 1 chương trình Real-time PCR khi sự cố mất điện xảy ra dài. Bộ lưu điện có công suất lớn là yêu cầu tối quan trọng trong trường hợp sự cố điện kéo dài như ở Việt Nam.
4	Tủ an toàn sinh học cấp II		1	Dùng cho thao tác tách chiết DNA nhằm bảo vệ con người cách ly với tác căn nguyên ngây bệnh. Tạo môi trường thao tác cách ly với bên ngoài tránh sự nhiễm DNA từ bên ngoài.
5	Tủ thao tác PCR		1	Sử dụng tiến hành Mix phản ứng PCR, tránh nhiễm DNA bên ngoài.
6	Máy ly tâm tốc độ cao		1	Phân tách các pha khác nhau trong dung dịch Thiết bị phụ trợ cho quá trình tách chiết ADN. Với quy trình tác chiết phổ biến hiện nay yêu cầu 10,000 xg đến 12,000 xg
7	Máy Mini Spin		1	Làm lắng nhanh mẫu, tránh dính mẫu lên thành các ống PCR
8	Máy ủ nhiệt khô		1	Hỗ trợ quá trình phân giải tế bào trong tách chiết AND, làm khô tủa. Hầu hết các quy trình tách chiết ADN hiện nay đều yêu cầu buớc ủ nhiệt.
9	Máy vortex		1	Dùng cho phòng tách chiết dùng cho trộn mẫu, hỗ trợ phá vỡ tế bào trong bước tách chiết ADN. Dùng cho khâu phối trộn hóa chất trong phòng mix PCR.
10	Micropipette. Pipette một kênh điều chỉnh thể tích. 1 bộ gồm 3 chiếc: Pipette 0.5 - 10µl; 10 -100 µl, 100 - 1000 µl.		3 (bộ)	1 bộ dùng cho quá trìnht tách chiết, 1 bộ dùng cho mix hóa chất PCR, 1 bộ dùng cho khu vực sau PCR (nếu PXN có thêm phòng điện di, lai phân tử).
11	Tủ đông bảo quản		2	Bảo quản mẫu bệnh phẩm và hóa chất
12	Tủ lạnh thông thường		2	Bảo quản hóa chất yêu cầu nhiệt độ 2 – 8oC và bảo quản hóa chất đông lạnh với số lượng nhỏ.
Toàn bộ thiết bị trên đã đủ cho phòng xét nghiệm sinh học phân tử phục vụ đếm tải lượng virus và xác định các căn nguyên nhiễm trùng. Các thiết bị có thể trang bị nếu có kinh phí để hình thức thêm chuyên nghiệp và có thể mở rộng thêm được các hướng nghiên cứu, ứng dụng trong tương lai.
1		Hệ thống tách chiết tự động		1	Dùng tách chiết ADN giảm thiểu sai sót do con người trong khâu tách chiết ADN. Giá trị của hệ thống khoảng 900 triệu
2		Máy PCR và hệ thống điện di		1	Máy real-time PCR cũng đã có chức năng của 1 máy PCR. Nếu sử dụng chức năng PCR nhiều nên đầu tư thêm máy PCR cho chuyên biệt. Máy PCR dùng cho thực hiện phản ứng RT, phản ứng PCR cho phục vụ cho giải trình tự gen hoặc mục đích khác. Giá trị khoảng: 150 triệu
3		Máy lắc ủ nhiệt khô		1	Giá từ 10 – 50 triệu tùy hãng.
4		Tủ âm sâu –86 oC		1	Dùng để bảo quản hóa chất hoặc mẫu. Giá trị khoảng 300,000,000 VNĐ
6		Hệ thống bàn thí nghiệm tiêu chuẩn, đồng bộ		1	Giúp phòng xét nghiệm chuyên nghiệp. Giá khoảng 200.000.000 VNĐ